Elektroforesis

Ilustrasi elektroforesis

Ilustrasi retardasi elektroforesis

Elektroforesis (dari bahasa Yunani "ηλεκτροφόρηση" yang berarti "membawa elektron") adalah gerakan partikel terdispersi relatif terhadap fluida di bawah pengaruh medan listrik yang seragam secara spasial. Elektroforesis partikel bermuatan positif (kation) kadang disebut kataforesis, sedangkan elektroforesis partikel bermuatan negatif (anion) kadang disebut anaforesis.

Fenomena elektrokinetik elektroforesis diamati untuk pertama kalinya pada tahun 1807 oleh profesor Rusia Peter Ivanovich Strakhov dan Ferdinand Frederic Reuss di Universitas Moskow, yang memperhatikan bahwa penerapan medan listrik konstan menyebabkan partikel tanah liat tersebar di air untuk migrasi. Hal ini pada akhirnya disebabkan oleh adanya antarmuka bermuatan antara permukaan partikel dan fluida di sekitarnya. Ini adalah dasar untuk teknik analisis yang digunakan dalam kimia untuk memisahkan molekul berdasarkan ukuran, muatan, atau afinitas pengikatan.

Elektroforesis digunakan di laboratorium untuk memisahkan makromolekul berdasarkan ukurannya. Teknik ini menerapkan muatan negatif sehingga protein bergerak menuju muatan positif. Elektroforesis digunakan secara luas dalam analisis DNA, RNA dan protein.

Sejarah

Teori

Partikel tersuspensi memiliki muatan permukaan listrik, sangat dipengaruhi oleh spesies teradsorpsi permukaan, di mana medan listrik eksternal menggunakan gaya elektrostatis Coulomb. Menurut teori lapisan ganda, semua muatan permukaan dalam fluida disaring oleh lapisan ion yang tersebar, yang memiliki muatan absolut yang sama tetapi bertanda berlawanan sehubungan dengan muatan permukaan. Medan listrik juga memberikan gaya pada ion-ion di lapisan difus yang arahnya berlawanan dengan yang bekerja pada muatan permukaan. Gaya terakhir ini sebenarnya tidak diterapkan pada partikel, tetapi pada ion dalam lapisan difus yang terletak agak jauh dari permukaan partikel, dan sebagiannya dipindahkan ke permukaan partikel melalui tegangan viskositas. Bagian gaya ini juga disebut gaya retardasi elektroforetik. Ketika medan listrik diterapkan dan partikel bermuatan yang akan dianalisis bergerak stabil melalui lapisan difus, total gaya yang dihasilkan adalah nol :

${\displaystyle F_{tot}=0=F_{el}+F_{f}+F_{ret}}$

Mempertimbangkan hambatan pada partikel yang bergerak karena viskositas dispersan, dalam kasus bilangan Reynolds rendah dan kuat medan listrik sedang E, kecepatan hanyut dari partikel terdispersi v cukup proporsional dengan medan yang diterapkan, yang meninggalkan mobilitas elektroforesis μ_e didefinisikan sebagai:

${\displaystyle \mu _{e}={v \over E}.}$

Teori elektroforesis yang paling terkenal dan banyak digunakan dikembangkan pada tahun 1903 oleh Smoluchowski:

${\displaystyle \mu _{e}={\frac {\varepsilon _{r}\varepsilon _{0}\zeta }{\eta }}}$,

Dimana ε_r adalah konstanta dielektrik media dispersi, ε₀ adalah permitivitas ruang kosong (C² N⁻¹ m⁻²), η adalah viskositas dinamis dari media dispersi (Pa s), dan ζ adalah potensial zeta (yaitu, potensial elektrokinetik bidang tergelincir pada lapisan ganda, satuan mV atau V).

Teori Smoluchowski sangat kuat karena ia bekerja untuk partikel terdispersi dalam bentuk apa pun pada konsentrasi apa pun.Ini memiliki batasan validitasnya. Ini mengikuti, misalnya, karena tidak termasuk panjang Debye κ⁻¹ (satuan m). Namun, panjang Debye harus menjadi penting untuk elektroforesis, sebagai berikut langsung dari Figur di sebelah kanan. Meningkatkan ketebalan lapisan ganda (DL) mengarah untuk menghilangkan titik gaya retardasi lebih jauh dari permukaan partikel. Semakin tebal DL, semakin kecil gaya retardasinya.

Analisis teoritis terperinci membuktikan bahwa teori Smoluchowski hanya valid untuk DL yang cukup tipis, ketika radius partikel a jauh lebih besar daripada panjang Debye:

${\displaystyle a\kappa \gg 1}$.

Model "lapisan ganda tipis" ini menawarkan penyederhanaan yang luar biasa tidak hanya untuk teori elektroforesis tetapi untuk banyak teori elektrokinetik lainnya. Model ini berlaku untuk sebagian besar sistem air, di mana panjang Debye biasanya hanya beberapa nanometer. Itu hanya rusak untuk koloid-nano dalam larutan dengan kekuatan ionik mendekati air.

Teori Smoluchowski juga mengabaikan kontribusi dari konduktivitas permukaan. Hal ini diungkapkan dalam teori modern sebagai syarat bilangan Dukhin kecil:

${\displaystyle Du\ll 1}$

Dalam upaya memperluas jangkauan validitas teori elektroforesis, kasus asimtotik sebaliknya dipertimbangkan, ketika panjang Debye lebih besar dari radius partikel:

${\displaystyle a\kappa <\!\,1}$.

Di bawah kondisi ini "lapisan ganda tebal", Hückel memprediksi hubungan berikut untuk mobilitas elektroforetik:

${\displaystyle \mu _{e}={\frac {2\varepsilon _{r}\varepsilon _{0}\zeta }{3\eta }}}$.

Model ini dapat berguna untuk beberapa nanopartikel dan cairan non-polar, di mana panjang Debye jauh lebih besar dari pada kasus biasa.

Ada beberapa teori analitik yang menggabungkan konduktivitas permukaan dan menghilangkan batasan bilangan Dukhin kecil, dipelopori oleh Overbeek. dan Booth. Teori modern, dan ketat berlaku untuk setiap potensial Zeta dan seringkali batang aκ berasal dari teori Dukhin – Semenikhin.

Dalam batas lapisan ganda tipis, teori ini mengkonfirmasi solusi numerik untuk masalah yang diberikan oleh O'Brien dan White.

Jenis elektroforesis

Elektroforesis kertas adalah jenis elektroforesis yang terdiri dari kertas sebagai fase diam dan partikel bermuatan yang terlarut sebagai fase gerak, terutama ialah ion-ion kompleks. Pemisahan ini terjadi akibat adanya gradasi konsentrasi sepanjang sistem pemisahan. Pergerakan partikel dalam kertas tergantung pada muatan atau valensi zat terlarut, luas penampang, tegangan yang digunakan, konsentrasi elektrolit, kekuatan ion, pH, viskositas, dan adsorpsivitas zat terlarut.

Elektroforesis gel ialah elektroforesis yang menggunakan gel sebagai fase diam untuk memisahkan molekul-molekul. Awalnya elektoforesis gel dilakukan dengan medium gel kanji (sebagai fase diam) untuk memisahkan biomolekul yang lebih besar seperti protein-protein. Kemudian elektroforesis gel berkembang dengan menjadikan agarosa dan poliakrilamida sebagai gel media.

Lihat pula

Bacaan lanjutan

• Voet and Voet (1990). Biochemistry. John Wiley & Sons. 
• Jahn, G.C.; D.W. Hall; S.G. Zam (1986). "A comparison of the life cycles of two Amblyospora (Microspora: Amblyosporidae) in the mosquitoes Culex salinarius and Culex tarsalis Coquillett". J. Florida Anti-Mosquito Assoc. 57: 24–27. 
• Khattak, M.N.; R.C. Matthews (1993). "Genetic relatedness of Bordetella species as determined by macrorestriction digests resolved by pulsed-field gel electrophoresis". Int. J. Syst. Bacteriol. 43 (4): 659–64. doi:10.1099/00207713-43-4-659 . PMID 8240949. 
• Barz, D.P.J.; P. Ehrhard (2005). "Model dan verifikasi aliran elektrokinetik dan transportasi dalam perangkat mikro-elektroforesis". Lab Chip. 5 (9): 949–958. doi:10.1039/b503696h. PMID 16100579. 
• Shim, J.; P. Dutta; C.F. Ivory (2007). "Modeling and simulation of IEF in 2-D microgeometries". Electrophoresis. 28 (4): 527–586. doi:10.1002/elps.200600402. PMID 17253629.  Parameter |s2cid= yang tidak diketahui akan diabaikan (bantuan)

Pranala luar

Wikimedia Commons memiliki media mengenai Electrophoresis.

Lihat informasi mengenai
elektroforesis di Wiktionary.

• Daftar mobilitas relatif